梁山伯病臥在床,梁母从祝英台家中返回,只帶回了祝英台的一封書信、一縷青絲、和一对玉扇墜。梁山伯得知兩人終究無緣,憂鬱成疾,悲痛離世。臨終前留下一个願望:與祝英台生不能同寢,死後希望同墓。

梁山伯興沖沖地趕到祝家,樓台相會,二人共同沉浸在同窗相識的回憶。祝英台告知九妹其實就是自己,並告訴梁山伯父親已為她另擇高門,梁山伯悲痛欲絕。兩人對美好的願望即將破滅,生離死別,肝腸寸斷。臨別時,立下了「生前不能夫妻配,死後也要成雙對」的誓言。

祝英台歸家後,已被其父以門當戶對為由許配了太守之子馬文才。祝英台聞訊與父親爭執,無果。適逢梁山伯來訪,父親允許祝英台與梁山伯見一面,並要他们做一個了斷。梁山伯與祝英台純潔的愛情遭到了橫暴的摧殘。

梁山伯依依相送十八里,途中祝英台不斷藉物抒情,暗示自己是個女子。無奈山伯憨厚,不解其意。最後祝英台只得託言家有九妹,品貌和她相像,願意嫁與梁山伯為妻。梁山伯接受了她的好意,祝英台臨別時,再三叮囑梁山伯及早邀媒下聘,盡快去迎娶。

祝英台和她的使女銀心女扮男裝到杭城求學。半路上,祝英台遇見了會嵇書生梁山伯 及他的書童四九同到杭城唸書。梁山伯與祝英台兩人一見如故,非常投機,決定在草橋亭上結拜為兄弟,共赴杭城拜師求學。